液氮超低溫保藏技術(shù)是將菌種保藏在-196 ℃的液態(tài)氮，或在-150 ℃的氮氣中的長(cháng)期保藏方法，它的原理是利用微生物在-130 ℃以下新陳代謝趨于停止而有效地保藏微生物。液氮罐廠(chǎng)家介紹其操作步驟如下：

1、安瓿管或凍存管的準備

用圓底硼硅玻璃制品的安瓿管，或螺旋口的塑料凍存管。注意玻璃管不能有裂紋。將凍存管或安瓿管清洗干凈，121 ℃下高壓滅菌(15～20) min，備用。

2、保護劑的準備

保護劑種類(lèi)要根據微生物類(lèi)別選擇。配制保護劑時(shí)，應注意其濃度，一般采用10 %～20 %甘油。

3、微生物保藏物的準備(如何為微生物保藏物做準備?)

4、預凍(如何為物質(zhì)做預凍處理?)

5、保藏

將安瓿管或塑料凍存管置于液氮罐中保藏。一般氣相中溫度為-150 ℃，液相中溫度為-196℃。

6、復蘇方法

液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管，應立即放置在38 ℃～40 ℃水浴中快速復蘇并適當搖動(dòng)。直到內部結冰全部溶解為止，一般約需50 s～100 s。開(kāi)啟安瓿管或塑料凍存管，將內容物移至適宜的培養基上進(jìn)行培養。

*后，通過(guò)操作，根據自身實(shí)驗體會(huì )，比較幾種菌種保藏方法的利弊，做出*終的答案。特別提醒大家在操作時(shí)一定要注重自身安全，做好防護措施。